Comparação de um ensaio de ELISA para a detecção de taquizoítas adesivos/invasivos de Neospora caninum
Pereira, Luiz MiguelYatsuda, Ana Patrícia
Neospora caninum, parasita do filo Apicomplexa, é causador da neosporose, doença responsável por perdas econômicas importantes na pecuária. Um fator comum entre os apicomplexas é o processo de invasão majoritariamente dirigido pelo parasita. Dentre as primeiras avaliações de moléculas candidatas, que possivelmente interferem no processo de invasão, o ensaio de invasão in vitro é um meio rápido e direto de selecionar futuros agonistas ou antagonistas. Este trabalho desenvolveu um novo ELISA baseado em cultura (Cell-culture ELISA) e um ensaio que mede a atividade transiente de β-galactosidase, aplicados para a detecção semiquantitativa de N. caninum em células Vero. Cell-culture ELISA é baseado em histoquímica e imunologia, resultando em uma reação colorimétrica. A atividade da β-galactosidase foi obtida pela transfecção transiente do gene LacZ sob controle do promotor RPS13 de N. caninum. Esses métodos avaliaram os efeitos da temperatura (37°C e 85°C) sobre a invasão e adesão. Os três métodos testados (real time PCR, atividade de β-galactosidase e ELISA) mostraram um padrão similar, indicando que diferentes métodos podem ser complementares. Adicionalmente, esse ELISA é adequado para aplicação em laboratórios carentes de uma complexa estrutura para métodos de detecção moleculares.
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