Comparative evaluation of conventional RT-PCR and real-time RT-PCR (RRT-PCR) for detection of avian metapneumovirus subtype A
Lage Ferreira, HelenaRosado Spilki, FernandoMercês Aparecida Bianchi dos Santos, MárciaServan de Almeida, RenataWeis Arns, Clarice
O metapneumovírus aviário (AMPV) pertence ao gênero Metapneumovirus, família Paramyxoviridae. Isolamento viral, sorologia e detecção do RNA genômico são atualmente as técnicas utilizadas para o diagnóstico desse agente. O objetivo do presente estudo foi comparar a detecção de RNA viral de seis isolados de AMPV, subtipo A (AMPV/A), utilizando diferentes métodos de RT-PCR convencional e real time RT-PCR (RRT-PCR). Duas novas técnicas de RT-PCR convencional e duas técnicas de RRT-PCR, ambas para a detecção dos genes da nucleoproteína (N) e da proteína de fusão (F), foram comparadas com um RT-PCR previamente estabelecido para a detecção do AMPV (gene da glicoproteína -G). Todos esses métodos foram capazes de detectar os isolados AMPV/A. As técnicas RRT-PCR (genes F e N) mostraram os menores limites de detecção (10(0.3) to 10¹ TCID50 mL-1). Os resultados sugerem que as técnicas RT-PCR convencional (gene F) e as técnicas de RRT-PCR (gene F e N) desenvolvidas no presente estudo podem ser utilizadas com sucesso para a detecção do AMPV/A. Além disso, o RRT-PCR gera resultados rápidos e sensíveis, o que o torna uma ferramenta alternativa para o isolamento viral.
Texto completo