An improved method for characterization of the mutation associated to porcine stress syndrome by PCR amplification followed by restriction analysis
Diniz Luerce, TessáliaGalli, VanessaMaia Cerqueira, GustavoSimionatto, SimoneAntônio Dellagostin, Odir
Uma mutação no gene que codifica o receptor ryanodine 1 (RYR1), também conhecido como gene do halotano (hal) ou gene do estresse suíno, está associada à Síndrome do Estresse Suíno (PSS). A mutação é geralmente detectada por PCR, a partir da amplificação de um fragmento de 81pb do gene hal, seguida por digestão com a endonuclease de restrição HhaI. O alelo normal (N) é cortado em dois fragmentos, enquanto que o alelo mutado (n) não é digerido pela enzima de restrição. A eletroforese do DNA digerido em gel de agarose corado com brometo de etídio permite a leitura do resultado. A interpretação correta é difícil devido ao pequeno tamanho dos fragmentos. Neste estudo, foi projetado um novo par de iniciadores para a amplificação de um fragmento de 144pb, o que facilita a leitura do resultado. Adicionalmente, foi otimizada a reação de PCR para permitir a amplificação a partir de um único bulbo capilar, acrescentado diretamente na mistura de PCR, sem tratamento prévio. Esse método foi usado para genotipar 165 reprodutores utilizados em granjas produtoras de matrizes. Quarenta e nove porcento dos animais apresentaram genótipo NN, 50% Nn e apenas 1% nn.
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