PCR and bioassays screening of Bacillus thuringiensis isolates from rice-fields of Rio Grande do Sul, specific to lepidopterans and coleopterans
Pinto, Laura Massochin NunesFiuza, Lidia Mariana
Visando a seleção de seis grupos de genes cry de Bacillus thuringiensis (Bt), que codificam proteínas ativas para coleópteros e lepidópteros pragas do arroz, 46 isolados de Bt provenientes de amostras de solos das regiões orizícolas do Rio Grande do Sul (RS), foram testados por PCR. Os isolados de Bt foram crescidos em Ágar Nutriente durante 12 h e submetidos a extração de DNA total. Os fragmentos amplificados foram analisados em géis de agarose (1-1,5%). Os resultados referentes ao total de isolados selecionados mostraram que 56,51% foram potencialmente específicos a lepidópteros (cry1, cry2 e cry9) e 21,73% a coleópteros (cry3 e cry7/8), tendo sua distribuição homogênea entre as regiões orizícolas do RS. Apenas os genes cry2 foram localizados somente na região Litoral. Nos bioensaios com lagartas de Spodoptera frugiperda o isolado Bt 2027-1 obteve a maior mortalidade corrigida (25%), o qual havia sido pré-selecionado pela presença de genes cry9. Para a mesma espécie, os testes de toxicidade através de proteínas purificadas de Bt aizawai HD68 revelaram uma DL50 de 0,95 mg/larva. Dois isolados de Bt causaram 100% de mortalidade às larvas de Oryzophagus oryzae, tendo esses sido pré-selecionados pela presença de genes cry3. Os resultados dos bioensaios confirmam a predição da atividade de Bt por PCR, a qual deve estar diretamente relacionada aos genes cry que codificam as proteínas inseticidas específicas.
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