Caracterização da glutamina sintetase da estipe excretora de amônio HM053 de Azospirillum brasilense
Núcleo de Fixação Biológica de NitrogênioGhenov, FernandaNúcleo de Fixação Biológica de NitrogênioGerhardt, Edileusa Cristina MarquesHuergo, Luciano FernandesNúcleo de Fixação Biológica de NitrogênioPedrosa, Fabio OliveiraWassem, RoseliNúcleo de Fixação Biológica de NitrogênioSouza, Emanuel Maltempi
A glutamina sintetase (GS), codificada por glnA, catalisa a conversão de L-glutamato e amônio em L-glutamina. Este processo dependente da hidrólise de ATP é a principal via de assimilação de nitrogênio na bactéria fixadora de nitrogênio Azospirillum brasilense. A estirpe HM053 de A. brasilense possui baixa atividade GS e excreta amônio no meio sob condições de fixação de nitrogênio. Neste trabalho, os genes glnA das estirpes do tipo selvagem e HM053 foram clonados em pET28a, sequenciados e superexpressos em E. coli. A enzima GS foi purificada por cromatografia de afinidade e caracterizada. A GS da estirpe HM053 possui uma substituição P347L que resulta em baixa atividade enzimática e torna a enzima insensível à adenililação pela adenililtransferase GlnE.
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